Для чего в пробирке гель?
Сашков В. А., к. биол. наук, доцент МПГУ им.
В. И. ЛенинаКовалевская С. Н., ассистент СПб ГМУ им ак.
И. П. ПавловаНепременным условием, гарантирующим получение достоверных результатов лабораторных анализов, является сохранение первичных аналитических характеристик взятых для исследования образцов венозной крови. Исключить влияние преаналитических факторов возможно, используя стандартизованные методы взятия, транспортировки и хранения проб. Одним из современных вариантов повышения качества лабораторных анализов является использование закрытого способа взятия венозной крови в вакуумные пробирки с разделительным гелем.
Гелевые технологии впервые были использованы в вакуумных пробирках Бектон Дикинсон для взятия крови еще в 1970 году и позволяют значительно сократить количество ошибок на преаналитическом этапе. Кроме того, образцы крови в таких пробирках легко транспортировать и хранить длительное время, что особенно актуально в условиях централизации лабораторных исследований.
Важным преимуществом геля является тот факт, что при центрифугировании он формирует стабильный барьер между супернатантом и остальными компонентами крови (сгусток, клетки). Это позволяет не только сохранить стабильность аналитов в пробе без необходимости использования вторичных пробирок, но также существенно увеличить срок хранения образцов.
Важным аспектом при работе с гелевыми пробирками является соблюдение рекомендуемой скорости, времени и температурного режима (25°С) при центрифугировании, использование центрифуг с нефиксированным углом ротора, а также не позднее чем через 2 часа после взятия крови. Соблюдение этих простых правил обеспечит формирование качественного гелевого барьера между супернатантом и клетками крови. После центрифугирования пробы крови в пробирках с гелем могут быть заморожены для последующего архивного хранения. Для этих целей пробирки охлаждаются до +4°С в течение 2 ч и после этого производится замораживание со скоростью −0,5°С/мин до -20°С или -70°С.
Для получения образца сыворотки высокого качества с возможностью удобной и безопасной транспортировки образца, была создана пробирка с активатором свертывания и разделительным гелем. Кремнезем (активатор свертывания крови) нанесен напылением на внутренние стенки пробирки и обеспечивает ускоренное формирования сгустка за 30 минут, а также и увеличивает выход сыворотки, по сравнению с обычными пробирками для сыворотки с красной крышкой. Инертный разделительный гель на основе акрила может быть расположен под углом ко дну пробирки, что существенно повышает эффективность сепарации. Получаемая в таких пробирках сыворотка отличается более продолжительной стабильностью аналитов, снижением вероятности образования фибринового сгустка в сыворотке, а также частоты возникновения гемолиза в процессе транспортировки.
Для лабораторий экспресс-диагностики особенно важным является скорость получения результата. Однако при попытке ускорить процедуру обработки проб у лаборантов может возникнуть искушение пренебречь рекомендуемым минимальным временем свертывания крови.
В таком случае, после центрифугирования пробирок с не полностью свернувшейся кровью в сыворотке могут образовываться нити или даже сгустки фибрина, которые могут исказить результаты анализов. Это ведет к необходимости повторного взятия крови, а нередко и к дорогостоящему ремонту лабораторного оборудования. Для решения этих задач были разработаны пробирки для ускоренного получения сыворотки, в которых в качестве активатора свертывания используется тромбин. Время свертывания крови в этих пробирках составляет рекордные 5 минут, а сыворотка получается более чистой и качественной.
Помимо лабораторий экспресс-диагностики, высокая потребность использования пробирок с тромбином и гелем может иметься у пациентов, находящихся на терапии антикоагулянтами. Получение качественной сыворотки для биохимических анализов у таких пациентов является непростой задачей ввиду присутствия в крови экзогенных антикоагулянтов и “желирования” получаемых образцов крови. Использование тромбина в качестве активатора свертывания крови позволяет получить качественный образец крови и избежать повторных взятий крови и связанных с этим дополнительных расходов на анализы.
При проведении биохимических и других видов анализов в ЛПУ зачастую также возникает необходимость проведения экспресс-анализов плазмы, с возможным последующим архивным хранением проб. Для этих целей были разработаны пробирки с гепарином лития и гелем. Использование плазмы для рутинных биохимических тестов позволяет также уменьшить время ожидания образования сгустка при использовании сыворотки. Дополнительным преимуществом использования плазмы перед сывороткой является ее больший выход из одного и того же объема крови и меньший риск образования нитей фибрина в образце. Плазма также может являться предпочтительным видом образца для проведения биохимических исследований крови у пациентов, находящихся на антикоагулянтной терапии.
Обработка проб крови при проведении анализов на вирусную нагрузку зачастую требует получение образцов неразведенной плазмы высокого качества, пригодной для сверхчувствительных методов анализа. При проведении анализов на ВИЧ, сифилис, гепатит, при исследовании крови доноров в банках крови на инфекции немаловажным является не только возможность транспортировки и кратковременного хранения плазмы после центрифугирования, но также ее длительное хранение в замороженном виде. Для этих целей была разработана пробирка с К2ЭДТА и разделительным гелем. Плазма, полученная в этих пробирках практически свободна от эритроцитов и гранулоцитов, концентрация моноцитов и лимфоцитов в ней незначительна, а концентрация тромбоцитов может быть выше, чем в цельной крови. После центрифугирования эритроциты и лимфоциты остаются под слоем геля, а плазма с тромбоцитами сверху над ним. При использовании таких пробирок плазму после центрифугирования можно транспортировать непосредственно в первичной пробирке. При этом важно помнить, что замораживание плазмы недопустимо при проведении некоторых видов анализов (для определения вирусной нагрузки при ВИЧ-инфекции вследствие повреждения РНК вирусов в ходе замораживания/оттаивания пробы).
Таким образом, можно с уверенностью констатировать, что гелевые технологии значительно сокращают время на получение качественных образцов крови для различных лабораторных анализов, позволяют получить высококачественные пробы и решить проблему их транспортировки и длительного хранения пробы, сократить ТАТ, что особенно актуально в условиях централизации лабораторных исследований.