|
СКАЧАТЬ (23.1 Кб в архиве, формат - MS Word) |
|
|
ПРИ ПУБЛИКАЦИИ МАТЕРИАЛОВ ССЫЛКА НА ИСТОЧНИК ОБЯЗАТЕЛЬНА !!! |
|
|
|
|
|
|
|
Министерство здравоохранения Российской Федерации
САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ
ХИМИКО-ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ АКАДЕМИЯ
О внедрении современных методов контроля пирогенности фармацевтических объектов
Доцент кафедры биотехнологии СПХФА Н.В. Глазова
В настоящее время особое внимание уделяется совершенствованию различных методов контроля лекарственных средств. Это связано с повышением требований к качеству фармацевтической продукции и обеспечением безопасности при ее использовании больными. Разработка и внедрение современных методов контроля является составной частью проблемы перехода к организации производства в соответствии с требованиями Правил правильного производства (ОСТ 42-510-98) – национальные Российские GMP.
Известно, что загрязненность воздуха, микробная обсемененность сырья и неудовлетворительное качество воды для инъекций могут приводить к присутствию пирогенных примесей в готовой продукции. Эти факторы также сказываются и на препаратах, которые приготовлены в условиях аптек. Слово "пироген" было введено в употребление венским хирургом Кристианом Теодором Бильротом в 1862 г и заимствовано из греческого языка. Слово "температура" было связано с элементом "огонь", что на греческом языке соответствует слову "ПИР" (PYR). Пирогены – продукты, вызывающие в организме повышение температуры. На сегодняшний день известно, что за этот процесс ответственен не один продукт, а группа различных продуктов и их соотношение.
Пирогены не только вызывают повышение температуры организма, но и угнетают иммунную систему человека. Они способны вызывать лихорадку, изменять метаболизм липидов и углеводов, активировать комплемент, вызывать аггрегацию тромбоцитов, внутрисосудистое свертывание крови, шок и смерть.
В этом процессе большую роль играют эндотоксины (липополисахариды), которые являются компонентами наружной стенки мембраны грамотрицательных микроорганизмов. В связи с выше сказанным, необходимо избегать попадания эндотоксина в организм человека. Поэтому конечные продукты при производстве медицинских препаратов необходимо обязательно проверять на наличие эндотоксинов. Для испытания на пирогенность лекарственных средств используют в настоящее время 2 метода: тест на присутствие пирогенов на кроликах и бактериологический тест присутствия эндотоксинов с помощью ЛИМУЛУС-АМЕБОЦИТНОГО ЛИЗАТА (ЛАЛ-тест).
Биологический метод контроля на кроликах был официально введен в начале 40-х годов прошлого столетия и обеспечивает определение пирогенности многих медицинских препаратов. Однако, этот метод имеет довольно много недостатков. Он используется только как запрещающий или разрешающий тест, т.е. является качественным, результаты зависят от индивидуальных особенностей животных и их состояния. К тому же таким методом нельзя проверить некоторые лекарства, например, седативные средства. Быстрая количественная оценка пирогенных примесей при производстве лекарственных препаратов является актуальной задачей фармацевтической промышленности. Почти 40 лет спустя, в начале 80-х годов прошлого столетия нововведенный ЛАЛ-тест почти везде заменил тест на кроликах. Практически ни одна зарубежная фармацевтическая фирма для быстрого текущего тестирования воды и препаратов не использует тест на кроликах, а с успехом применяет ЛАЛ-тест. В качестве примера можно привести следующие данные: если раньше
крупная фармацевтическая фирма использовала в год около 25000 пирогенных тестов на кроликах при производстве инфузионных растворов, то в настоящее время используется около 1000 тестов на кроликах и параллельно около 100000 определений с помощью ЛАЛ-теста.В основе ЛАЛ-теста лежит способность лизата амебоцитов (клеток гемолимфы реликтовых животных – мечехвостов) специфически реагировать с эндотоксинами грамотрицательных бактерий. Для определения эндотоксина в образцах существует множество полуколичественных и количественных методик проведения ЛАЛ-теста:
- гель-тромб тест (gel-clot), в котором результаты определяются визуально по образованию твердого геля;
- кинетико-турбидиметрический количественный метод, оценивающий помутнение реакционной смеси;
- хромогенный метод, количественная оценка которого связана с появлением окрашивания реакционной смеси в результате расщепления хромогенного субстрата;
- колориметрический метод, с использованием определения количества осажденного белка из ЛАЛ-реагента.
В настоящее время ЛАЛ-тест узаконен Фармакопеями многих стран, а с 1997 г введен в Фармакопею РФ. Процесс замены температурного теста на кроликах ЛАЛ-тестом потребовал 10-летнего накопления данных по параллельному использованию этих двух тестов. Сравнение результатов многолетних исследований не позволяет полностью исключить применение биологического метода контроля на животных, поэтому введение ЛАЛ-теста в частную фармакопейную статью для различных препаратов возможно лишь как альтернативного метода.
Помимо описанных выше методов, принятых в Фармакопее, которые являются дорогостоящими и не всегда доступными, актуальной задачей остается создание экспресс методов анализа бактериальных эндотоксинов на различных стадиях технологического процесса, а так же в воде для инъекций. В качестве простого и эффективного метода в СПХФА был разработан физико-химический метод анализа пирогенности, основанный на хроматографическом анализе продуктов кислотного гидролиза эндотоксинов. Кроме того, перспекивным на наш взгляд является использование люминесцентных методов анализа воды, основанных на зависимости интенсивности люминесценции от количества пирогенообразующих компонентов.
Выше представлена лишь краткая информация по проблеме определения микробных эндотоксинов. Подробную информацию и практических навыки слушатели получают на семинаре, проводимом СПХФА. Каждый из слушателей может оценить качество своих препаратов предложенными методами и обсудить возможность совместной работы по составлению частной фармстатьи с использованием ЛАЛ-теста.