|
СКАЧАТЬ (188 Кб в архиве, формат - MS Word) |
|
|
ПРИ ПУБЛИКАЦИИ МАТЕРИАЛОВ ССЫЛКА НА ИСТОЧНИК ОБЯЗАТЕЛЬНА !!! |
|
Оценка подлинности растительных экстрактов, как сырья для БАД.
Melissa officinalis L.
- Мелисса лекарственная.Комарова Е.Л., канд.фарм. наук ( ЗАО “Натуральные ингредиенты” )
Власов А.М.,
Чукарина Е.В., Эллер К.И., доктор хим.наук ( ГУ НИИ питания РАМН)
Мелисса лекарственная (Mellissa officinalis L.), английское наименование растения
Lemon Balm – это многолетнее растение семейства Яснотковые (Lamiaceae). Имеет четырехгранный, прямостоящий, ветвистый стебель высотой до 120 см, листья супротивные, по краям зубчатые, с верхней стороны темно-зеленые, снизу - более светлые, покрыты железистыми волосками. Цветки мелкие, беловатого или розового цвета, собраны в ложные мутовки, расположенные в пазухах верхних листьев. Растение имеет душистый лимонный запах, а также заметный лимонный привкус. Родина мелиссы – Средиземноморье, для промышленных целей растение культивируют в странах Южной Европы и Ближнего Востока.Это одно из наиболее популярных лекарственных и ароматических растений в традиционной медицине Европы. Помимо эфирного масла мелиссы, которое высоко ценится в пищевой и медицинской промышленности, благодаря приятному аромату, способности улучшать аппетит, оказывать успокаивающее и противомикробное действие, из мелиссы также производят сухой экстракт. Технология производства сухого экстракта мелиссы включает не только выделение экстрактивных веществ из листьев и травы растения, но и максимальное сохранение летучих компонентов, несмотря на сравнительно невысокое его содержание в исходном сырье (от 0,02 до 0,2%).
В составе эфирного масла мелиссы присутствуют цитраль (до 60%), цитронеллаль, мирцен, гераниол, линалоол, цинеол. Также растение содержит другие ценные биологически активные вещества, это фенолокислоты - розмариновая кислота, этиловый эфир розмариновой кислоты, хлорогеновая кислота, кофейная кислота, а также танины, катехины, лютеолин-7-О-гликозид, рамназин, апигенин-7-О-гликозид, тритерпеноиды - олеаноловая, урсоловая кислоты, даукостерин и др.
Фармакологическая активность мелиссы к настоящему времени изучена достаточно детально. Это высокая антиоксидантная активность, а также седативное, антидепрессатное действие, спазмолитическая, противовирусная и антибактериальная активность, антитиреотропный эффект. Рекомендуемые дозировки стандартизованного экстракта мелиссы лекарственной (содержание розмариновой кислоты не менее 3%) составляют около 160-200 мг за 30 мин - 1 час до сна.
Выраженная противовирусная и противомикробная активность обусловлена присутствием в растении танинов, тримеров кофейной кислоты, а также группы фенилпропаноидов (розмариновая кислота и др).
Согласно проведенным исследованиям, экстракт мелиссы лекарственной заметно ускоряет время заживления язв вирусного герпеса в области рта, а также показывает способность блокировать распространение вирусов.
Флавоноиды, фенилпропаноиды и танины мелиссы отвечают не только за антигерпесную активность, но также за противоопухолевую (подавление синтеза белка в раковых клетках) и тиреоидно-регуляторную активность. В ходе лабораторных исследований было обнаружено, что экстракт мелиссы эффективен при лечении болезни Грейвса. Активные компоненты мелиссы блокируют антитела, а также действие тироид-стимулирующего гормона, препятствуя стимуляции увеличения щитовидной железы.
Для оценки качества и стандартизации БАД содержащих мелиссу нами предложен метод ВЭЖХ. В качестве стандартного вещества использована розмариновая кислота, которая является индикаторным компонентом, характеризующим подлинность мелиссы лекарственной, и позволяет идентифицировать мелиссу от похожих на нее растений, таких как котовник кошачий и котовник крупноцветковый, не содержащих розмариновую кислоту. Помимо мелиссы лекарственной, розмариновая кислота может быть использована для стандартизации экстрактов розмарина лекарственного (Rosmarinus officinalis L.), в небольших количествах она встречается также в мяте перечной, змееголовнике молдавском и почечном чае.
Рис. 1. Розмариновая кислота
Рис.2. ВЭЖХ-хроматограмма сухого экстракта розмарина R040201 с содержанием розмариновой кислоты 4%
Рис.3. Хроматограмма водно-спиртового экстракта мелиссы с содержанием розмариновой кислоты 13%
Методика определения розмариновой кислоты методом ВЭЖХ.
В 100 мл круглодонную колбу помещают около 1,0 г измельченного растительного сырья или препарата на основе растительного сырья, или 0,1 г сухого экстракта или навеску готового продукта, соответствующую 0,1 г сухого экстракта. Далее прибавляют 100 мл 60% метанола, перемешивают и нагревают на водяной бане с обратным холодильником 30 минут, затем озвучивают на ультразвуковой бане и отфильтровывают. Аликвоту от полученного раствора фильтруют через мембранный фильтр 0,45мкм и используют для анализа методом ВЭЖХ.
Хроматографическая система:
|
Колонка |
Состав подвижной фазы |
Скорость ПФ |
Температура колонки |
Детектирование |
|
250 × 4,6 мм Phenomenex Luna 5u C18(2), США |
ГРАДИЕНТ А-0,1%фосфорная кислота; В-Ацетонитрил; 0мин-12%В, 25мин-50%В |
1мл/мин |
250С |
СФМ λ=330нм |
Параметры разделения:
|
Индикаторный компонент |
tR, мин. |
K |
N |
|
Розмариновая кислота |
13,111 |
5,243 |
49469 |
Где tR, мин – время удерживания, К – коэффициент емкости колонки, N- число теоретических тарелок.
Метрологические характеристики методики количественного определения розмариновой кислоты в фиточаях и БАД:
|
Наименование компонента |
Х |
s2 |
s |
P |
t(Р, f) |
∆x |
Ε |
|
Розмариновая кислота |
31,2 |
0,4037 |
0,630 |
95% |
2,78 |
0,79 |
2,54 % |
Параметры количественного определения розмариновой кислоты.
|
Наименование компонента |
Предел обнаружения, мг/л 1:3 |
Предел количественного определения мг/л 1:20 |
Диапазон линейных концентраций мг/л |
Параметры линейной регрессии |
|
|
Уравнение сглаживающей прямой (у-площадь пика, х содержание в-ва мг/мл) |
Коэфф ициент корреляции |
||||
|
Розмариновая кислота |
0,3 |
1,5 |
1-1000 |
y=20727x-579 |
0,9875 |
Содержание определяли по формуле или методом абсолютной калибровки по градуировочному графику.
С – концентрация соответствующего стандартного раствора, мг/мл;
S1 – площадь пика розмариновой кислоты в анализируемой пробе;
S2 – площадь пика стандарта розмариновой кислоты;
V – общий объем экстракта, мл;
m – масса навески, мг;
Данная методика была использована при стандартизации ряда продуктов, содержащих мелиссу лекарственную и розмарин лекарственный, нами были получены следующие результаты:
Таблица. Содержание розмариновой кислоты в готовой продукции БАД и сырье, для изготовления БАД на основе мелиссы лекарственной и розмарина лекарственного
|
Наименование образца |
Содержание розмариновой кислоты в образце |
|
Трава мелиссы |
0,24 мг/г |
|
Сухой экстракт мелиссы, серия 000666/06 |
29,87 мг/г |
|
Сухой экстракт мелиссы 5:1, серия 240706-5 |
60,48 мг/г |
|
Сухой экстракт мелиссы 7:1, серия 240706-7 |
77,63 мг/г |
|
Сухой экстракт розмарина R040201 |
40,98 мг/г |
|
Сухой экстракт розмарина, 20040325 |
12,55 мг/г |
|
Сухой экстракт розмарина - антиоксидант карнозиновая кислота 25%, серия RME050816 |
0,59 мг/г |
|
Ароматическая добавка к чаю “Тихая ночь”, сырье |
0,10 мг/г |
|
БАД к пище “Комплексная очистка дыхания”, таблетки |
2,50 мкг/таб |
|
БАД к пище “Бальзам безалког. “Алтайские травы №1”, сироп |
2,60 мг/100 г |
|
БАД к пище “Бальзам безалког. “Алтайские травы №4”, сироп |
9,40 мг/100 г |
|
БАД к пище “Бальзам безалког. “Алтайские травы №7”, сироп |
0,50 мг/100 г |
|
БАД к пище “Бальзам безалког. “Алтайские травы №9”, сироп |
1,70 мг/100 г |
|
БАД к пище “Бальзам безалког. “Алтайские травы №10”, сироп |
3,20 мг/100 г |
|
БАД к пище “Бальзам безалког. “Алтайские травы №11”, сироп |
0,10 мг/100 г |
Таким образом, предложенный метод анализа позволяет повести оценку качества растительного сырья, технических полупродуктов и готовой продукции Мелиссы лекарственной, а также ряда других растений, включая водорастворимые экстракты из Розмарина лекарственного, активными компонентами которых являются фенилпропаноиды, включая розмариновую кислоту и ее производные.