Скачать публикацию (7.90 Кб в архиве, формат MS Word)

"Реабилитация" №2(3) 2013 г.

ПРИ ПУБЛИКАЦИИ МАТЕРИАЛОВ ССЫЛКА НА ИСТОЧНИК ОБЯЗАТЕЛЬНА !!!

PDF-версия номера (9,88 Мб)

САЙТ МЕДРЕЕСТР - УДОБНЫЙ ПОИСК МЕДТЕХНИКИ И ТОРГУЮЩИХ ФИРМ


Методика электрофореза препарата карипазим

А.В. Максимова, В.В. Кирьянова

Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования

Ключевые слова: препарат карипазим, папаин, полипептид, подвижность препарата в электрическом поле, изоэлектрическая точка, эффективность электрофореза.

Резюме: Изучали подвижность в электрическом поле полипептидного препарата карипазим. Обладая высокой эндопротеазной активностью, карипазим находит широкое применение в лечебной практике. Дано обоснование терапевтической методике электрофореза препарата карипазим, отработаны оптимальные параметры.

Summary: Mobility in electric field of polypeptide preparation carripazym was studied. Carripazym has wide application in medical practice due to high endoprotease activity. Therapeutic method of carripazym electrophoresis was substantiated, optimum parametres of electrophoresis were elaborated.

Актуальность

Цель исследования: обоснование возможности введения препарата карипазим в организм человека при помощи постоянного тока. Разработка метода лечебного электрофореза препарата. Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

• определить подвижность препарата карепазим в электрическом поле

• найти изоэлектрическую точку препарата

• подобрать оптимальное значение pH растворителя, обеспечивающий наибольший массоперенос препарата.

Материалы и методы: В основных пробах изучали электрофоретическую подвижность препарата карепазим (U=50W), а в контрольных пробах изучали диффузию препарата (U=0W) в камерной установке для аналитического электрофореза при значениях pH растворителя 5.0, 5.4, 5.8, 6.2, 6.6, 7.0, 7.4, 7.8, 8.2, 8.7, 9.0.

Подкисление растворителя осуществлялось при помощи HCl, а подщелачивание – 0.1 N NaOH. Определение pH растворителя производилось при помощи pH-метра. Время экспозиции в основных (электрофорез) и контрольных (диффузия) пробах 60 мин.

Концентрацию полипептидов в пробах определяли микрореакцией Lowry O.H. (*) в модификации Малахова М.Я.

Материально-техническое обеспечение: Для осуществления медицинской технологии применяются аппараты физиотерапевтические для гальванизации и электрофореза, разрешенные к применению в РФ: ЭЛФОР-проф, Элфор, Поток-1.

Результаты и их обсуждение: Основным действующим компонентом препарата карепазим является протеолитический фермент растительного происхождения папаин, полученный из папайи (дынного дерева). Помимо папаина в состав препарата карепазим входят сопутствующие ферменты сока папайи: химопапаин А, химопапаин В, лизоцин, каллаза, липаза, глютамин-трансфераза.

В медицинской практике используется лиофильно высушенный порошок препарата карепазим в виде водного раствора. Единицы активности препарата карепазим выражаются по классификации международной федерации фармацевтики (100 мг соответствует 350 Fip-ПЕ). Во флаконе содержится 100 мг (350 ПЕ).

В картонной пачке – 1 флакон.

Агрегатное состояние препарата карепазим при комнатной температуре – твердое кристаллическое вещество.

Молекулярная масса основного компонента препарата карипазим папаина – 23406 Д. Папаин является полипептидом, состоящим из 212 аминокислотных остатков, на N-конце молекулы которого аминокислотой является изолейцин, на C-конце – аспарагин. Хорошо растворим в воде, водных солевых растворах и в 70% метиловом и этиловом растворах. Является монотиоловой цистеиновой эндопротеазой. В отличие от пепсина, папаин активен не только в кислых, но и в нейтральных и щелочных средах (диапазон pH 3—12, оптимум pH 5-8). Он сохраняет активность в широком температурном диапазоне (до 50-60°C), обладает относительно широкой специфичностью. При pH 5-7,5 папаин расщепляет амиды, пептиды, белки и эфиры основных аминокислот с незамещенной аминогруппой.

Препарат карипазим обладает протеолитической активностью. Расщепляет некротизированные ткани, разжижает вязкие секреты, экссудаты, сгустки крови. По действию препарат карипазим близок к химотрипсину и трипсину.

Применяется при ожогах III-а степени в качестве средства для ускорения отторжения струпов и очищения гранулирующих ран от остатков гнойно-некротических тканей. Используется местно в виде аппликаций 0,5%, 1% или 2% растворов в зависимости от толщины струпа. Растворы готовятся ex tempore в 0,5% растворе новокаина или изотоническом растворе хлорида натрия. Салфетка, смоченная препаратом, помещается на ожоговую поверхность, закрывается влагонепроницаемой повязкой. Одновременно обрабатывают не более 30% общей поверхности тела. Повязка меняется 1 раз в сутки или 1 раз в 2 суток, при этом удаляются отслоившиеся некротические ткани. Курс лечения от 4 до 12 дней.

В.Л. Найдиным описан способ лечебного применения карипазима в методике лечебного электрофореза для лечения больных с грыжами межпозвонковых дисков. Данная методика не имеет научного обоснования, так как автором не были представлены данные предварительных лабораторных исследований по изучению подвижности препарата в электрическом поле, работы по подбору оптимальных условий для наибольшего массопереноса препарата в электрическом поле, а также клинические испытания методики.

Папаин, а также другие биологически активные компоненты препарата карипазим являются полипептидами. По своей биофизической природе полипептиды относятся к веществам амфолитного ряда (перемещаются в электрическом поле как в сторону анода, так и в сторону катода в зависимости от pH среды). При определенном среднем значении pH молекула полипептида остается неподвижной в электрическом поле (изоэлектрическая точка). Для эффективного введения в организм препаратов полипептидной природы необходим подбор оптимального значения pH среды, при котором обеспечивается наибольший электрогенный массоперенос лекарственного

вещества в электрическом поле. Выявление оптимального значения pH среды, при котором обеспечивается наибольшая эффективность электрофореза, определяет полярность активного электрода. Пренебрежение этими принципиальными методическими установками приводит к понижению или нуллификации эффективности лечебного электрофореза.

Установлено, что минимальный массоперенос полипептидов препарата карипазим (условная изоэлектрическая точка) соответствует pH 8.7. При данном значении кислотности среды концентрация полипептидов в приемной камере в основных и контрольных пробах практически не отличалась.

Оптимальная полярность активного электрода положительная (в пробах с pH менее 7.0 массоперенос препарата был выше, чем в сопоставимых пробах с pH более 7.0).

Наибольшая эффективность электрофореза имеет место при слабокислой реакции среды, причем наибольший массоперенос вещества происходит при pH 5.4-5.8.

Таким образом, лабораторный этап наших исследований показал, что изоэлектрическая точка препарата карипазим сдвинута в щелочную сторону и соответствует величине pH 8,7, наибольший массоперенос обнаруживается слабокислой реакции раствора (pH 5.4-5.8), оптимальная полярность активного электрода – анод.

Заключение: Исходя из полученных результатов, нами разработана методика лечебного электрофореза препарата карипазим. Содержимое флакона (100 мг, т.е. 350 ПЕ) растворяется в 5 мл дистиллированной воде, подкисляется 0,1 N соляной кислотой (4-5 капель) до значения pH 5,4-5,8. Раствор наносится на лекарственную прокладку, которая помещается под гидрофильную прокладку лечебного электрода-анода. Для повышения эффективности электрофореза (увеличения количества введенного в покровы тела препарата карипазим) в качестве растворителя может быть использован 20% димексид (4 мл дистиллированной воды в смеси с 1 мл димексида).

Электрофорез гальваническим током проводится при плотности тока 0,1-0,15 мА/см2, при этом у пациента должно возникать субъективное ощущение приятного равномерного покалывания, жжения под электродными пластинами и не должно быть дискомфортных ощущений. Время от 15 до 30 мин, увеличивается по 2 мин через процедуру. Курс 10-12 процедур (при грыжах межпозвонковых дисков – до 20 процедур), проводимых ежедневно или через день

Электрофорез синусоидальными модулированными токами (СМТ) проводится при II режиме, III и IV родом работы, при частоте модуляции 100-80 Гц, глубине модуляции 50%, а с 5-й процедуры – 100%. Время – по 5-7 мин каждым родом работы, общая продолжительность процедуры 10-14 мин. Курс 10-12 процедур (при грыжах межпозвонковых дисков – до 20 процедур), проводимых ежедневно или через день.

Список литературы:

1. Кирьянова В.В. Гальванизация и лекарственный электрофорез. Нелекарственная медицина №1/2005-9с.

2. Малахов М.Я. Метод регистрации эндогенной интоксикации. Пособие для врачей. – 1995.

3. Улащик В.С. Теория и практика лекарственного электрофореза. – Минск, Беларусь. – 1976 г. – 207 с.

4. Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Farr A.L. et al. Protein measurement with the Folin phenol reagent// J. Biol.Chem. – 1951. – Vol. 193. – P. 265-275.