"СОВРЕМЕННАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА" №1 2018 г.

Скачать издание (pdf)

Листать издание (pdf-вьювер)

Информация для рекламодателей (pdf)

Rambler's Top100

САЙТ МЕДРЕЕСТР - УДОБНЫЙ ПОИСК МЕДТЕХНИКИ И ТОРГУЮЩИХ ФИРМ


“NSE – ИФА – БЕСТ” – новый набор реагентов

Н. Н. Сорокина, Н. А. Аншиц, АО “Вектор-Бест”, Новосибирск

NSE (нейронспецифическая енолаза, 2-фосфо-D-глицерат-гидролиаза) – внутриклеточный гликолитический фермент с молекулярной массой 78 кДа принадлежит к группе 2-фосфо-D-глицерат гидролаз – внутриклеточных ферментов, катализирующих превращение 2-фосфо-D-глицерата в фосфоенолпируват. Енолазы участвуют в процессе гликолиза, осуществляемом во всех клетках организма, где они присутствуют в виде изоферментов: димеров, образованных из трех типов белковых субъединиц (α, β, γ), отличающихся по иммунологическим свойствам. Наиболее распространенной является αα-изоформа енолазы, выявленная в различных типах тканей, а изоферменты, содержащие αβ- и ββ-субъединицы, – только в сердце и поперечно-полосатой мускулатуре. В нервных и нейроэндокринных клетках, а также в опухолях, образующихся в результате их малигнизации, в гликолизе задействованы изоформы фермента γγ- и αγ-, которые были названы нейронспецифической енолазой (НСЕ, NSE) и впервые описаны Moore и McGregor в 1965 году. Показано, что NSE присутствует также в легочной ткани плода, а у взрослого человека – преимущественно в нейронах мозга, клетках периферической нервной системы и в форменных элементах крови (эритроцитах, тромбоцитах, плазматических клетках).

Концентрация NSE в сыворотке крови большинства здоровых людей не превышает 13 нг/мл, однако при простудных заболеваниях, почечной недостаточности, доброкачественных опухолях легких и печени она может возрастать до 20 нг/мл. Повышенный уровень этого фермента, как правило, определяется у больных с опухолями нейроэктодермального и нейроэндокринного происхождения (нейробластомы, медуллобластомы, ретинобластомы, медуллярная карцинома щитовидной железы, карциноид, феохромоцитома, мелкоклеточный рак легких), он обеспечивает высокую скорость гликолиза, активное разрастание опухоли и ее распространение в окружающие ткани. Поэтому при применении NSE в лабораторной диагностике в качестве онкомаркера этих новообразований обычно используют дискриминационный уровень (ДУ) его концентрации в сыворотке крови 25 нг/мл. Анализ данного фермента позволяет диагностировать мелкоклеточный рак легких, обладающий нейроэндокринными свойствами, а также дифференцировать его от других видов рака легких, для которых эти свойства не характерны. Результаты таких исследований приобретают особую важность, когда рутинная диагностика рака легких не может быть выполнена из-за тяжести заболевания или сопутствующей патологии. Кроме того, NSE применяется для диагностики нейробластомы – агрессивного злокачественного новообразования у детей со способностью к быстрому росту и развитию метастазов. При значении ДУ онкомаркера 25 нг/мл чувствительность выявления этой солидной опухоли достигает 85%.

Поскольку уровень NSE коррелирует с клиническим состоянием пациентов с опухолями нейроэндокринной этиологии, количественный анализ этого фермента в сыворотке крови используется для оценки эффективности проводимой терапии, раннего выявления рецидивов и образования метастазов, а также прогнозирования течения заболевания. Показано, что концентрация NSE после успешно проведенного лечения постепенно снижается до нормальных значений, а ее нарастание происходит у большинства онкобольных еще до появления клинических симптомов рецидива. Стойкое повышение уровня этого фермента в крови связано, как правило, с неэффективностью проводимой терапии, неблагоприятным прогнозом заболевания.

В ряде исследований результаты определения NSE в сыворотке крови и спинномозговой жидкости пациентов ишемическими и геморрагическими инсультами, эпилепсией, паркинсонизмом и другими деструктивными заболеваниями центральной нервной системы были успешно использованы для оценки степени повреждения нейронов и нарушения общей целостности гематоэнцефалического барьера.

В АО “Вектор-Бест” разработан и выпускается набор реагентов, предназначенный для определения концентрации NSE в сыворотке крови с помощью “sandwich”-варианта иммуноферментного анализа (ИФА). Основными компонентами набора “NSE – ИФА – Бест” являются пара моноклональных антител (МАТ) к NSE различной специфичности, одни МАТ иммобилизованы на поверхность лунок стрипированных планшет, другие – используются в виде конъюгата с пероксидазой хрена.

Аналитическая чувствительность набора реагентов “NSE – ИФА – Бест” рассчитанная как концентрация, соответствующая среднему арифметическому значению оптической плотности нулевой калибровочной пробы (n = 12) плюс два стандартных отклонения от этой величины, составляет – 1 нг/мл. Рабочий динамический диапазон измерения концентраций NSE – от 1 до 130 нг/мл. Однако при опухолях нейроэндокринного и нейроэктодермального происхождения уровень этого фермента в сыворотке крови больных может значительно превышать верхнюю границу данного диапазона.

В подобных случаях исследуемые пробы необходимо разбавлять в 10 раз раствором для разведения образцов из комплекта набора.

Набор реагентов “NSE – ИФА – БЕСТ” был использован для определения NSE у 265 условно здоровых доноров крови из г. Новосибирска и г. Рубцовска (Алтайский край). При этом было показано, что концентрация фермента в сыворотке крови обследуемых лиц варьировала от 0,4 до 10 нг/мл, а ее среднее значение составило 4,6 нг/мл. Эти цифры хорошо согласуются с опубликованными ранее данными, в которых уровень NSE в образцах сыворотки крови здоровых доноров не превышал 12,5 нг/мл.

Результаты, полученные с помощью набора реагентов “NSE – ИФА – БЕСТ” сравнили с результатами импортного аналога CanAg NSE EIA (Fujirebio Diagnostics Inc., Швеция). Параллельно исследовали 35 образцов сыворотки крови пациентов с опухолями нейроэндокринного и нейроэктодермального происхождения. Сыворотки были любезно предоставлены сотрудниками Областного детского онкогематологического центра (п. Краснообск Новосибирской области). Полученные экспериментальные данные, обработанные с помощью программы Statistica и представленные в виде диаграммы рассеивания (Рис.), свидетельствуют, что результаты количественного анализа NSE, проведенного с применением наборов “NSE – ИФА – БЕСТ” и CanAg NSE EIA, хорошо коррелируют (r = 0,98) в широком диапазоне концентраций.

Таким образом, новый набор реагентов “NSE – ИФА – БЕСТ” обладает высокой чувствительностью, позволяет адекватно определять концентрацию NSE в образцах сыворотки крови и может быть рекомендован для широкого использования в лабораторной диагностике.




Rambler's Top100