СКАЧАТЬ (5.40 Кб в архиве, формат MS Word) |
|
ПРИ ПУБЛИКАЦИИ МАТЕРИАЛОВ ССЫЛКА НА ИСТОЧНИК ОБЯЗАТЕЛЬНА !!! |
|
ИННОВАЦИОННЫЙ МЕТОД ПРЕНАТАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ РЕЗУС-ФАКТОРА ПЛОДА ПО КРОВИ БЕРЕМЕННОЙ РЕЗУС-ОТРИЦАТЕЛЬНОЙ ЖЕНЩИНЫ
Мацкевич О. М., ООО “Ген-технология”, г. Самара
Тюмина О.В., ГБУЗ “Самарский областной центр планирования семьи и репродукции”
Несовместимость плода и матери по резус-фактору является основной причиной гемолитической болезни новорожденного. До 95% всех клинически значимых случаев гемолитической болезни плода обусловлены несовместимостью по Rh-фактору. Согласно акушерским рекомендациям беременность резус-отрицательной женщины от резус-положительного мужчины следует вести как беременность резус-положительным плодом. Для предотвращения резус-сенсибилизации матери используют анти-резус иммуноглобулины. В то же время, при наличии резус-отрицательного плода эта профилактическая мера, связанная с введением белкового препарата является бесполезным, небезопасным и дорогостоящим мероприятием (7000–15 000 рублей). Разработанные в ООО “Ген-технология” диагностические наборы “ДНК-резус ребенка” (Россия, РУ № ФСР2010/09565) и инновационный метод диагностики резус антигена основан на полимеразно-цепной реакции (далее – ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией, может быть воспроизведён в любой ПЦР лаборатории.
Цель исследования – оценить новый метод неинвазивной диагностики резус-фактора плода по крови беременной женщины.
Материалы и методы исследования
В Самарской области новый метод диагностики успешно используется с 2011 года. По состоянию на 01.09.2013 г. определение резус-фактора плода проведено 3415 резус-отрицательным беременным женщинам, начиная с 10-й недели беременности.
Для определения резус-фактора плода используется фетальная ДНК из плазмы крови беременной.
Определение резус-фактора плода по крови беременной резус-отрицательной женщины основывается на том, что в плазме крови беременной женщины присутствует внеклеточная фетальная ДНК. Для правильного определения резус-фактораплода по крови беременной женщины необходимо соблюдение следующих условий: срок беременности – с 10 недели; правильное обращение с плазмой; выделение ДНК в максимально быстрые сроки; выделение ДНК с использованием надёжной технологии; организация работы в ПЦР-лаборатории согласно действующим национальным нормам; строгое соблюдение “Инструкции по применению набора реагентов для идентификации гена резус-фактора (RHD) плода в крови матери “ДНК-резус ребенка” и “ДНК-резус ребенка плюс”, а так же “Инструкции по применению комплекта реагентов для пробоподготовки плазмы крови для проведения полимеразной цепной реакции “ДНК-спин-Ц” (инструкции размещены на сайте ООО “Ген-технология” www.test-gen.ru).
Исследование проводится в несколько этапов:
1. Взятие крови и выделение плазмы. Исследуемым материалом для проведения анализа являетсявенозная кровь беременной резус-отрицательнойженщины. Кровь сдаётся натощак, собирается в пробирку с антикоагулянтом EDTA в количестве 7–10 мл. Плазма должна доставляться в лабораторию в течение16–24 ч после взятия материала.
2. Выделение ДНК. Проводится колоночно-адсорбционным методом с использованием рекомендуемых комплектов наборов.
3. Проведение амплификации с детекцией в режиме реального времени. Пробоподготовка – стандартная для проведения ПЦР.
4. Регистрация и учёт результатов анализа.
Результаты исследования и их обсуждение
Все 3415 женщин, проходившие обследование, были резус-отрицательные по результатам серологического анализа. Проведён анализ чувствительности и специфичности метода по выборке из 252 резус-отрицательных женщин, у которых стал известен резус-фактор рожденного ребенка. Резус-фактор рожденных детей оценивался серологическим методом в роддоме.ДНК-анализ 189 (75%) образцов указал на положительный резус-фактор плода, в 63 (25%) случаях был установлен отрицательный резус-фактор. Результаты анализа были подтверждены анализом крови детей после их рождения.
У семи детей резус-фактор был определен неправильно в роддоме. После получения результата анализа на определение резус-фактора этих детей, не совпадающего с нашими результатами, у них был взят буккальный соскоб и проведено генетическое определение резус-фактора. Результат данного анализа подтвердил правильность определенного нами резус-фактора плода по крови беременной женщины. 2,7% (7 детей) – неправильное определение резус-фактора детей в роддоме, у одного ребенка выявленное расхождение подтверждено (1 случай ложно-положительной реакции). Таким образом, чувствительность и специфичность применяемого метода диагностики составили 99%.
Выводы
– новые диагностические наборы для идентификации гена резус-фактора (RHD) “ДНК-резус ребенка” российского производства можно рекомендовать для внедрения в медицинскую практику акушерам-гинекологам для ранней неинвазивной диагностики резус-фактора плода по крови резус отрицательной беременной женщины;
– введение антирезус-иммуноглобулина резус-отрицательным женщинам, беременным резус-положительным плодом, в дальнейшем приведет к снижению процента резус-сенсибилизированных женщин в России.
– в результате применения данной методики определяются резус отрицательные беременные женщины (25% от общего числа резус-отрицательных беременных), у которых плод резус-отрицательный, и они не нуждаются в применении антирезус-иммуноглобулина.