СКАЧАТЬ (7.68 Кб в архиве, формат MS Word)

"Лабораторная диагностика" №1(5) 2012 г.

ПРИ ПУБЛИКАЦИИ МАТЕРИАЛОВ ССЫЛКА НА ИСТОЧНИК ОБЯЗАТЕЛЬНА !!!

ПОДПИСКА НА ЖУРНАЛ

САЙТ МЕДРЕЕСТР - УДОБНЫЙ ПОИСК МЕДТЕХНИКИ И ТОРГУЮЩИХ ФИРМ


Диагностика антифосфолипидного синдрома

Антитела к кардиолипину IgG и IgM

История лабораторной диагностики антифосфолипидного синдрома АФС берет начало в 1983 году, в котором Harris разработал первый радиоиммунный для выявления антител к кардиолипину. Его использование в клинике позволило в том же году Graham Hughes сопоставить клинические проявления и лабораторные данные, что привело к описанию “антикардиолипинового синдрома”, позднее переименованного в АФС. АФС представляет собой аутоиммунным нарушением коагуляции, представляя основную причину тромбозов у молодых лиц, и одну из ведущих причин привычного невынашивания беременности.

В основе АФС лежит появление антифосфолипидных антител (АФЛА). Они представляют собой гетерогенную популяцию иммуноглобулинов, взаимодействующих с отрицательно заряженными, реже с нейтральными фосфолипидами. Эти антитела in vitro нарушают образование протромбинового комплекса (протромбиназы), который состоит из фактора 10, фактора 5, фосфолипидов из тромбоцитов и кальция, что приводит к гипокоагуляции и удлинению времени основных коагуляционных тестов. Однако in vivo у больных АФС имеет место тромбообразование, генез которого окончательно не установлен.

Нарушение функции протромбинового комплекса ведет к развитию протромботического состояния с изменением сосудисто-тромбоцитарного гемостаза и хроническим потреблением факторов коагуляции, напоминающего ДВС синдром. При АФС тромбоз происходит на фоне обезвоживания, инфекции или венозного застоя. Кроме коагулопатии АФС сопровождается нарушениями микроциркуляции, проявляющимися язвами кожи, микроангиопатией почек, кожным ливедо.

Название “антифосфолипидные антитела” не отражает самой сущности взаимодействия антифофолипидных антител со своими антигенами, в котором наряду с фосфолипидами важную роль играет белковые кофакторы этих аутоантител, одним из которых является бета2-гликопротеин-I (бета2ГП). Другими белковыми кофакторами фосфолипидов могут быть протромбин, тромбомодулин, протеины С и S, фактор XI, аннексин V, кининоген, мембранные белки тромбоцитов и эндотелиоцитов. Кроме того, антикардиолипиновые антитела перекрестно реагируют с фосфатидилсерином и другими отрицательно заряженными фосфолипидами, антителами к тромбоцитам, антителами к окисленным липопротеидам низкой плотности и с протромбином. Таким образом антифосфолипидные антитела реагируют с гетерогенной группой фосфолипидов и белковых антигенов сосудистого русла.

Для обнаружения АКЛА является метод ИФА. При детекции АКЛА обязательным является наличие в тестируемом фосфолипидном субстрате b2-ГП, который представляет собой белковый кофактор. Обычно он присутствует в составе буферов для разведения сыворотки больных. С методической точки зрения метод выявления АКЛА для диагностики АФС более корректно называть “бета2-ГП зависимые антикардиолипиновые антитела”, поскольку действительной мишенью аутоантител является неоантиген, образующийся при взаимодействии кардиолипина и бета2ГП. В тест системах для выявления АКЛА первого поколения использовался бета2ГП сыворотки крупного рогатого скота, в то время как в современных тест-системы используется рекомбинантный человеческий белок (тест 01.02.15.145).

АКЛА имеют несомненное патогенетическое значение в развитии коаглопатии. В культурах АКЛА стимулируют выработку внутреннего фактора макрофагами. АКЛА реагируют с тромбоцитами с их активацией, являются причиной тромбоцитопений у большинства больных АФС. АКЛА активируют эндотелиальные клетки с экспрессией факторов адгезии. Под действием АКЛА снижается антикоагулянтная активность протеина С. Наконец АКЛА увеличивают частичное тромбопластиновое время in vitro, феномен известный под названием “волчаночный антикоагулянт”. В качестве антигена могут быть использованы другие отрицательно заряженные фосфолипиды, в частности, фосфатидилсерин или фосфатидилинозитол. Кардиолипин (дифосфатидил-глицерол) имеет значительную структурную гомологию с другими фосфолипидами, поэтому если отсутствуют антитела к кардиолипину (АКЛА) обычно отсутствуют другие антифосфолипидные антитела (АФЛА). Целесообразность выявления антител к другим представителям фосфолипидов (фосфатидилэтаноламину и протромбину) в практической диагностике пока не доказана.

Исторически определения антикардиолипиновых антител более стандартизовано по сравнению с другими АФЛА. В 1986 году были созданы стандарты сывороток, содержащих антикардиолипиновые антитела, которые используются поныне. Иногда эти стандарты называют стандартами Harris, который разработал единицы GPL для АКЛА класса IgG и единицы MPL для АКЛА IgM. Одна единица представляет собой связывающую активность 1 мкг аффинно очищенных поликлональных АКЛА. Вторичный стандарт калибруется против первичных стандартов. Необходимо определение АКЛА обоих классов, так как аутоантитела каждого класса могут определяться независимо друг от друга. Результаты обследования интерпретируются с помощью градации на низкие (менее 40 единиц), средний (от 40 до 80 единиц) и высокие (более 80 единиц) титры антител. АКЛА могут быть обнаружены как в сыворотке, так и плазме крови. Положительный результат определяется при среднем или высоком их титре, т.е более 40 GPL и MPL единиц. Наличие гетерогенных поликлональных АКЛА от различных пациентов в стандартах приводит к различиям между коммерческими наборами. Инактивация комплемента нагреванием может приводить к ложно-положительным результатам, а повторное перемораживание приводит к снижению титров аутоантител. Согласно лабораторным классификационным критериям АФС пациент должен быть положительным минимум по одному из тестов (кардиолипину, бета-2 ГП-1 или ВА), по меньшей мере, через 12 недель. Наличие постоянно повышенных АКЛА в титре более 60 GPL единиц может предсказать присутствие у пациента ВА и положительных результата антител к бета-2-ГП-1.

В то же время, очевидны недостатки единиц Harris для стандартизации тест систем. Фактически реактивы разных производителей представляют собой разные методы, результаты которых сложно сопоставить друг с другом. Для преодоления этих расхождений были предложены новые стандарты АКЛА, основанные на моноклональных очеловеченных антител HCAL и EY2C9. На сегодняшний день подавляющее число тест-систем для обнаружения АКЛА на отечественном рынке по прежнему калиброваны в единицах Harris.

АКЛА в низких и средних титрах отмечаются у 30-40% пациентов с СКВ, что позволяет использовать их в качестве одного из серологических маркеров этого заболевания. Их выявление не коррелирует с возрастом больных, длительностью заболевания или особыми чертами его течения, включая наличие полиартрита, серозита или васкулита. В то же время наличие высоких титров антикардиолипиновых антител указывает на риск развития вторичного АФС у больного с СКВ (вторичный АФС). Но СКВ является не единственным ревматологическим заболеванием, сопровождающимся АКЛА. Сравнительно часто АКЛА находят у больных системной склеродермией, васкулитами и васкулитоподобными состояниями, например, при синдроме Бехчета и болезни Крона. При отсутствии ДБСТ заболевание рассматривают как первичный АФС.

АКЛА, относящиеся обычно к изотипу IgG2, обычно максимальны непосредственно перед развитием тромбоза и несколько снижаются сразу после его возникновения, что свидетельствует об их потреблении в процессе коагуляции. Увеличение титра АКЛА при развитии клинической картины тромбоза способствует диагностике АФС.

В то же время антикардиолипиновые антитела являются одними из наиболее распространенных аутоантител, присутствующих у клинически здоровых лиц. Частота их обнаружения значительно выше частоты АФС. Значимые концентрации антикардиолипиновых антител появляются на фоне широкого ряда инфекционных заболеваний. Среди наиболее частых индукторов антикардиолипиновых антител описаны инфекции вирусами гепатита С, ВИЧ, Эпштейна-Барра, парвовирусом В19, аденовирусом, стрептококком, спирохетами, геликобактером, сальмонеллами, лептоспирами, токсоплазмой. Обычно при инфекциях появляются антикардиолипиновых антител класса IgM в низком титре, которые плавно снижаются после выздоровления. Это требует повторных определений АКЛА с перерывом в 1,5 месяца, что соответствует времени обновления пула иммуноглобулинов сыворотки. Онкологические заболевания, хронические интоксикации, в том числе алкоголизм, индуцируют появление АКЛА, что обуславливает сложность интерпретации этого показателя. При этом не находят антител к бета-2-ГП-1 и не бывает тромбозов. Целесообразно проводить развернутое обследование антифосфолипидного синдрома, включающее кроме антикардиолипиновых антител также выявление антинуклеарного фактора и антител к бета-2 гликопротеину (тест 01.02.15.240).

Аutoimmun.ru